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化妆品卫生规范2007版之微生物检验方法

文章来源:http://www.iwuchen.com/  2015年08月15日  点击数:2630

化妆品卫生规范

Hygienic Standard for Cosmetics

中华人民共和国卫生部 二○○七年一月

第四部分    微生物检验方法

Methods of Microbiological Test

一、总则


1   范围 本规规定了化妆品微生物学检验的基本要求。

本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。

 

2  

2.1   天平。

2.2   高压菌器。

2.3   振荡

2.4   三角250mL

2.5   玻璃

2.6   玻璃

2.7   刻度管,1mL10mL

2.8   研钵均质器。

2.9   恒温浴箱。

 

3   试剂

3.1   生理

成分:氯化                                       8.5g

蒸馏水加                          1000mL

,分装到加玻璃珠的三角瓶内,每瓶  90mL103.43kPa121  15  lb20min

高压灭菌。

3.2   SCDLP 液体培养基成分:酪蛋白胨     17g 大豆蛋白胨   3g 氯化钠    5g 磷酸氢二  2.5g  葡萄     2.5g 卵磷脂      1g 吐温  80      7g 蒸馏   1000mL

制法先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其它成分混合,加热溶解,调 pH

7.27.3 分装,103.43kPa121  1lb20min 高压灭菌。注意振荡,使沉淀于底层的 吐温 80 混合,冷却至 25℃左使用。

注:无酪蛋白胨和大豆蛋白胨,也可用多胨代替。

3.3   灭菌体石蜡。

3.4   灭菌 80

 

4   集及注意事

4.1   采集的样具有,一批化量大机抽数量装单位。检验时,应分别从两个包装单位以上的样品中共取 10g  10mL。包装量小于 20g的样品,采样量可适当增加样品包装数量。


4.2   检验样品格保的包。容有破检验打开 止样品被污染。

4.3   接到品后应立即登记编写检验序号并按检验要求尽快检验如不能及时检验, 样品应放在室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。

4.4   只有一个同时种分细菌、化则宜部分 做细菌检验,再将剩余样品做其它分析。

4.5   检验过程打开全部作结须防物的和扩 所用器皿及材料均应事先灭菌全部操作应在无菌室内进行或在相应条件下按无菌操作 规定进行。

4.6   如检粪大肠菌群或其它致病菌自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。

 

5   的制备

5.1   液体

5.1.1   性的液体样品,可量取 10mL 加到 90mL 灭菌生盐水中,如样品少于 10mL 仍按 10 释法进行。如为 5mL 加到 45mL 灭菌生理盐水,混匀后,制成 110 检液。

5.1.2   液体样品,取样品 10mL,先加 5mL 灭菌液体石蜡混匀,再加 10mL灭菌的吐

80,在 40℃~44浴中振荡混合 10min,加入灭菌的生理盐水 75mL(在 40℃~44 水浴中预温,在 4044℃水浴中化,制成 110 的悬液。

5.2   膏、、乳剂半固体状样品

5.2.1   性的样品称取 10g到装有玻璃珠及 90mL灭菌生理盐水的三角瓶中充分 振荡混匀,静置 15min。用其上清液作为 1:10 检液。

5.2.2   性样品称取 10g灭菌的研钵中 10mL 灭菌液体石蜡研磨成粘稠状, 再加入 10mL 灭菌吐温 80,研磨待解后,加 70mL 灭菌生盐水,在 4044浴中 充分混合,制成 110 检液。

5.3   固体

称取 10g加到 90mL 灭菌生理盐水中充分振荡混匀使其分散混悬静置后取上 清液作为 110 的检液。

如有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称  10g  加入  90mL灭菌生理盐水, 均质 1min2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称 10g 品,加 10mL灭菌液体

10mL 吐温 8070mL 灭菌生理盐水,均质 3min5min

 



二、菌落总数

 

1   范围 本规规定了化妆品中菌落总数的检验方法。 本规范适用于化妆品菌落总数的测定。

 

2   定义 本规采用下列定义

菌落总Aerobic bacterial count指化妆品检样经过处理在一定条件下培养(如 培养基成分培养温度培养时间pH 需氧性质等1g1mL检样中所含菌落的总 数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。

定菌落总数便判明样品细菌污染程度,是样品进行生学总评的综

据。

 

3  

3.1   三角250mL

3.2   量筒200mL

3.3   pH 精密 pH

3.4   高压菌器。

3.5   试管15×150mm

3.6   灭菌皿:直径 9cm

3.7   灭菌度吸管,10mL1mL

3.8   酒精

3.9   恒温养箱:36±1

3.10   放大

 

4   试剂

4.1   生理水:见总则中 3.1

4.2   卵磷、吐温 80营养琼脂培养基

4.2.1

:蛋白胨

20g

 

牛肉膏

3g

 

氯化钠

5g

 

琼脂                                        15g

卵磷脂                                      1g 吐温  80              7g 蒸馏                                        1000mL

4.2.2   制法:先脂加蒸馏加热加入吐温  80,将分(除琼 脂外加到其余的蒸馏水中溶解入已溶解的卵磷脂吐温 80混匀 pH 值为 7.1

7.4,加入脂,103.43kPa121 15 lb20min 高压灭菌,储存于冷暗处备用。

4.3   0.5化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chlorideTTC 成分TTC      0.5g


蒸馏                                   100mL

溶解后过滤,103.43kPa121  15 lb20min 高压灭菌,装于棕色试剂瓶,置 4 备用。

 

5   步骤

5.1   用灭吸管吸取 110 稀释的 2mL别注入到两个灭菌平皿内,每皿 1mL。另

1mL 9mL 生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面换一支吸管,并充 分混匀制成 1100 吸取 2mL分别注入到两个灭菌平皿内每皿 1mL样品含 菌量高,还可再稀释成 11000110000,…等,每种稀释度应换 1 支吸管。

5.2    将融并冷  4550磷脂吐  80  营养琼培养基倾注到平皿内,每皿约15mL随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待琼脂凝固后,翻转平皿,置 36±1℃培养箱内培养  48h±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿,加入约  15mL  卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基,待琼脂凝固后,翻转平皿,置 36±1培养箱内培养 48h±2h为空 白对照。

5.3   为便区别化妆品中的颗粒与菌落可在每 100mL 脂吐温 80 养琼脂中加入 1m0.5 TTC 溶液,如有细菌存在,培养后菌落呈红色,而化妆品的颗粒颜色无变化。

 

6   方法

先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大 5 倍~10 放大镜检查,以防遗漏。记 下各平皿的菌落数后求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数若平皿中有连成片状的菌 落或花点样菌落蔓延生长时该平皿不宜计数若片状菌落不到平皿中的一半而其余一半 中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘以 2,以代全皿菌落数。

 

7   及报告

7.1   首先取平均菌落数在 30 个~300 个之间平皿,作为菌落总数测定的范围。当只有 一个稀释度的平均菌落数符合此范围时即以该平皿菌落数乘其稀释倍(见表 1 中例 1

7.2   若有个稀释度其平均菌落数均在 30 300 个之间则应求出菌落总数之比值 来决定若其比值小于或等于 2报告其平均数若大于则报告其稀释度较低的平皿

的菌落数(见表 1 中例 2 及例 3

7.3   若所稀释度的平均菌落数均大于  300  ,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之(见表 1 4

7.4   若所稀释度的平均菌落数均小于 30 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍 数报告之(见表 1 5

7.5   若所稀释度的平均菌落数均不在 30 300 个之间其中一个稀释度大于 300 个, 而相邻的另一稀释度小于 30 个时则以接近 30 300 均菌落数乘以稀释倍数报告(见

1 中例 6

7.6   若所的稀释度均无菌生长,报告数为每 g 或每 mL  10CFU

7.7   菌落数的报告菌落数在 10 以内时按实有数值报告之大于 100 二位有 效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数, 可用 10 数来表(见表 1 方式栏在报告菌落数“不可计应注明样品的 稀释度。



1

1365

164

20

16400

16000 1.6×104

2

2760

295

46

1.6

38000

38000 3.8×104

3

2890

271

60

2.2

27100

27000 2.7×104

4

不可计

4650

513

513000

510000 5.1×105

5

27

11

5

270

270  2.7×102

6

不可计

305

12

30500

31000 3.1×104

 

7

0

0

0

<1×10

 

*CFU:菌落形成单位。

 



三、粪大肠菌群

 

1   范围 本规规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。 本规适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。

 

2    定义 本规采用下列定义

粪大Fecal coliforms一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌 44.5

℃±0.5 24h48h 能发酵乳糖产酸并产气。 该菌直接来自粪便,是重要的卫生指示菌。

 

3   仪器

3.1   恒温浴箱或隔水式恒温箱:44±0.5

3.2   温度

3.3   显微

3.4   载玻

3.5   接种

3.6   电磁

3.7   三角250mL

3.8   试管15×150mm

3.9   小倒

3.10   pH  pH 试纸。

3.11   高压菌器。

3.12   灭菌管,10mL1mL

3.13   灭菌皿:直径 90mm

 

4   试剂

4.1   双倍糖胆盐(含中和剂)培养基 成分蛋白胨     40g

猪胆盐                                        10g

乳糖                                            10g

0.4%溴甲酚水溶                 5mL 卵磷脂                   2g 吐温  80                                              14g 蒸馏    1000mL

制法将卵磷脂、吐温 80 到少量蒸馏水中。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解到其余的 蒸馏水中加到一起混匀 pH 7.4加入 0.4%溴甲紫水溶液混匀分装试(每 支试管中加一个小倒管68.95kPa115  10 lb20min 灭菌。

4.2   伊红兰(EMB

成分蛋白胨                                        10g

        乳糖                                            10g 

 磷酸氢二钾      2g 琼脂                         20g



2%伊红水溶液                         20mL

0.5蓝水                      13mL

蒸馏                                 1000mL

制法先将琼脂加到 900mL 馏水中加热溶解然后加入磷酸氢二钾蛋白胨混匀, 使之溶解再以蒸馏水补足至 1000mL校正 pH 7.27.4分装于三角瓶内103.43kPa

121  1lb15min 高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至 60左右无 菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液,摇匀。倾注平皿备用。

4.3   蛋白水(作靛基质试验用) 成分蛋白胨(或胰蛋白胨)  20g

氯化钠       &nbs