化妆品卫生规范2007版之微生物检验方法

文章来源:http://www.iwuchen.com/  2015年08月15日  点击数:2475

化妆品卫生规范

Hygienic Standard for Cosmetics

中华人民共和国卫生部 二○○七年一月

第四部分    微生物检验方法

Methods of Microbiological Test

一、总则


1   范围 本规规定了化妆品微生物学检验的基本要求。

本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。

 

2  

2.1   天平。

2.2   高压菌器。

2.3   振荡

2.4   三角250mL

2.5   玻璃

2.6   玻璃

2.7   刻度管,1mL10mL

2.8   研钵均质器。

2.9   恒温浴箱。

 

3   试剂

3.1   生理

成分:氯化                                       8.5g

蒸馏水加                          1000mL

,分装到加玻璃珠的三角瓶内,每瓶  90mL103.43kPa121  15  lb20min

高压灭菌。

3.2   SCDLP 液体培养基成分:酪蛋白胨     17g 大豆蛋白胨   3g 氯化钠    5g 磷酸氢二  2.5g  葡萄     2.5g 卵磷脂      1g 吐温  80      7g 蒸馏   1000mL

制法先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其它成分混合,加热溶解,调 pH

7.27.3 分装,103.43kPa121  1lb20min 高压灭菌。注意振荡,使沉淀于底层的 吐温 80 混合,冷却至 25℃左使用。

注:无酪蛋白胨和大豆蛋白胨,也可用多胨代替。

3.3   灭菌体石蜡。

3.4   灭菌 80

 

4   集及注意事

4.1   采集的样具有,一批化量大机抽数量装单位。检验时,应分别从两个包装单位以上的样品中共取 10g  10mL。包装量小于 20g的样品,采样量可适当增加样品包装数量。


4.2   检验样品格保的包。容有破检验打开 止样品被污染。

4.3   接到品后应立即登记编写检验序号并按检验要求尽快检验如不能及时检验, 样品应放在室温阴凉干燥处,不要冷藏或冷冻。

4.4   只有一个同时种分细菌、化则宜部分 做细菌检验,再将剩余样品做其它分析。

4.5   检验过程打开全部作结须防物的和扩 所用器皿及材料均应事先灭菌全部操作应在无菌室内进行或在相应条件下按无菌操作 规定进行。

4.6   如检粪大肠菌群或其它致病菌自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。

 

5   的制备

5.1   液体

5.1.1   性的液体样品,可量取 10mL 加到 90mL 灭菌生盐水中,如样品少于 10mL 仍按 10 释法进行。如为 5mL 加到 45mL 灭菌生理盐水,混匀后,制成 110 检液。

5.1.2   液体样品,取样品 10mL,先加 5mL 灭菌液体石蜡混匀,再加 10mL灭菌的吐

80,在 40℃~44浴中振荡混合 10min,加入灭菌的生理盐水 75mL(在 40℃~44 水浴中预温,在 4044℃水浴中化,制成 110 的悬液。

5.2   膏、、乳剂半固体状样品

5.2.1   性的样品称取 10g到装有玻璃珠及 90mL灭菌生理盐水的三角瓶中充分 振荡混匀,静置 15min。用其上清液作为 1:10 检液。

5.2.2   性样品称取 10g灭菌的研钵中 10mL 灭菌液体石蜡研磨成粘稠状, 再加入 10mL 灭菌吐温 80,研磨待解后,加 70mL 灭菌生盐水,在 4044浴中 充分混合,制成 110 检液。

5.3   固体

称取 10g加到 90mL 灭菌生理盐水中充分振荡混匀使其分散混悬静置后取上 清液作为 110 的检液。

如有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称  10g  加入  90mL灭菌生理盐水, 均质 1min2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称 10g 品,加 10mL灭菌液体

10mL 吐温 8070mL 灭菌生理盐水,均质 3min5min

 



二、菌落总数

 

1   范围 本规规定了化妆品中菌落总数的检验方法。 本规范适用于化妆品菌落总数的测定。

 

2   定义 本规采用下列定义

菌落总Aerobic bacterial count指化妆品检样经过处理在一定条件下培养(如 培养基成分培养温度培养时间pH 需氧性质等1g1mL检样中所含菌落的总 数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。

定菌落总数便判明样品细菌污染程度,是样品进行生学总评的综

据。

 

3  

3.1   三角250mL

3.2   量筒200mL

3.3   pH 精密 pH

3.4   高压菌器。

3.5   试管15×150mm

3.6   灭菌皿:直径 9cm

3.7   灭菌度吸管,10mL1mL

3.8   酒精

3.9   恒温养箱:36±1

3.10   放大

 

4   试剂

4.1   生理水:见总则中 3.1

4.2   卵磷、吐温 80营养琼脂培养基

4.2.1

:蛋白胨

20g

 

牛肉膏

3g

 

氯化钠

5g

 

琼脂                                        15g

卵磷脂                                      1g 吐温  80              7g 蒸馏                                        1000mL

4.2.2   制法:先脂加蒸馏加热加入吐温  80,将分(除琼 脂外加到其余的蒸馏水中溶解入已溶解的卵磷脂吐温 80混匀 pH 值为 7.1

7.4,加入脂,103.43kPa121 15 lb20min 高压灭菌,储存于冷暗处备用。

4.3   0.5化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chlorideTTC 成分TTC      0.5g


蒸馏                                   100mL

溶解后过滤,103.43kPa121  15 lb20min 高压灭菌,装于棕色试剂瓶,置 4 备用。

 

5   步骤

5.1   用灭吸管吸取 110 稀释的 2mL别注入到两个灭菌平皿内,每皿 1mL。另

1mL 9mL 生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面换一支吸管,并充 分混匀制成 1100 吸取 2mL分别注入到两个灭菌平皿内每皿 1mL样品含 菌量高,还可再稀释成 11000110000,…等,每种稀释度应换 1 支吸管。

5.2    将融并冷  4550磷脂吐  80  营养琼培养基倾注到平皿内,每皿约15mL随即转动平皿,使样品与培养基充分混合均匀,待琼脂凝固后,翻转平皿,置 36±1℃培养箱内培养  48h±2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿,加入约  15mL  卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基,待琼脂凝固后,翻转平皿,置 36±1培养箱内培养 48h±2h为空 白对照。

5.3   为便区别化妆品中的颗粒与菌落可在每 100mL 脂吐温 80 养琼脂中加入 1m0.5 TTC 溶液,如有细菌存在,培养后菌落呈红色,而化妆品的颗粒颜色无变化。

 

6   方法

先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大 5 倍~10 放大镜检查,以防遗漏。记 下各平皿的菌落数后求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数若平皿中有连成片状的菌 落或花点样菌落蔓延生长时该平皿不宜计数若片状菌落不到平皿中的一半而其余一半 中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘以 2,以代全皿菌落数。

 

7   及报告

7.1   首先取平均菌落数在 30 个~300 个之间平皿,作为菌落总数测定的范围。当只有 一个稀释度的平均菌落数符合此范围时即以该平皿菌落数乘其稀释倍(见表 1 中例 1

7.2   若有个稀释度其平均菌落数均在 30 300 个之间则应求出菌落总数之比值 来决定若其比值小于或等于 2报告其平均数若大于则报告其稀释度较低的平皿

的菌落数(见表 1 中例 2 及例 3

7.3   若所稀释度的平均菌落数均大于  300  ,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之(见表 1 4

7.4   若所稀释度的平均菌落数均小于 30 则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍 数报告之(见表 1 5

7.5   若所稀释度的平均菌落数均不在 30 300 个之间其中一个稀释度大于 300 个, 而相邻的另一稀释度小于 30 个时则以接近 30 300 均菌落数乘以稀释倍数报告(见

1 中例 6

7.6   若所的稀释度均无菌生长,报告数为每 g 或每 mL  10CFU

7.7   菌落数的报告菌落数在 10 以内时按实有数值报告之大于 100 二位有 效数字,在二位有效数字后面的数值,应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数, 可用 10 数来表(见表 1 方式栏在报告菌落数“不可计应注明样品的 稀释度。



1

1365

164

20

16400

16000 1.6×104

2

2760

295

46

1.6

38000

38000 3.8×104

3

2890

271

60

2.2

27100

27000 2.7×104

4

不可计

4650

513

513000

510000 5.1×105

5

27

11

5

270

270  2.7×102

6

不可计

305

12

30500

31000 3.1×104

 

7

0

0

0

<1×10

 

*CFU:菌落形成单位。

 



三、粪大肠菌群

 

1   范围 本规规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。 本规适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。

 

2    定义 本规采用下列定义

粪大Fecal coliforms一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌 44.5

℃±0.5 24h48h 能发酵乳糖产酸并产气。 该菌直接来自粪便,是重要的卫生指示菌。

 

3   仪器

3.1   恒温浴箱或隔水式恒温箱:44±0.5

3.2   温度

3.3   显微

3.4   载玻

3.5   接种

3.6   电磁

3.7   三角250mL

3.8   试管15×150mm

3.9   小倒

3.10   pH  pH 试纸。

3.11   高压菌器。

3.12   灭菌管,10mL1mL

3.13   灭菌皿:直径 90mm

 

4   试剂

4.1   双倍糖胆盐(含中和剂)培养基 成分蛋白胨     40g

猪胆盐                                        10g

乳糖                                            10g

0.4%溴甲酚水溶                 5mL 卵磷脂                   2g 吐温  80                                              14g 蒸馏    1000mL

制法将卵磷脂、吐温 80 到少量蒸馏水中。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解到其余的 蒸馏水中加到一起混匀 pH 7.4加入 0.4%溴甲紫水溶液混匀分装试(每 支试管中加一个小倒管68.95kPa115  10 lb20min 灭菌。

4.2   伊红兰(EMB

成分蛋白胨                                        10g

        乳糖                                            10g 

 磷酸氢二钾      2g 琼脂                         20g



2%伊红水溶液                         20mL

0.5蓝水                      13mL

蒸馏                                 1000mL

制法先将琼脂加到 900mL 馏水中加热溶解然后加入磷酸氢二钾蛋白胨混匀, 使之溶解再以蒸馏水补足至 1000mL校正 pH 7.27.4分装于三角瓶内103.43kPa

121  1lb15min 高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至 60左右无 菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液,摇匀。倾注平皿备用。

4.3   蛋白水(作靛基质试验用) 成分蛋白胨(或胰蛋白胨)  20g

氯化钠                                          5g

蒸馏                                 1000mL

制法将上述成分加热融化 pH 值为 7.07.2小试管103.43kPa121  15

lb15min 高压灭菌。

4.4   靛基试剂

柯凡试剂 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中然后缓慢加入浓盐酸 25mL 试验法:接种细菌于蛋白胨水中,于  44℃±0.5  24h±2h。沿管壁加柯凡克试

0.3mL0.5mL,轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。 胨应含有丰富的色氨酸每批蛋白胨买来后应先用已知菌种鉴定后方可使用。

4.5   革兰染色液:

4.5.1   制备

4.5.1.1   紫染色液:

                                                    1g

95乙醇                                            20mL

1草酸铵水溶                                80mL

将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。

4.5.1.2   氏碘液:

                                                           1g            2g                                                      300mL

将碘碘化钾先进行混合加入蒸馏水少许充分振摇待完全溶解后再加蒸馏水至

300mL

4.5.1.3   液:95醇。

4.5.1.4   液:

1黄复染液:

                                              0.25g

95                                          10mL 馏水    90mL 将沙溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。

2稀石碳酸复红液:称取碱性复红 10g研细,加 95%乙醇 100mL放置过夜,滤 纸过滤。取该液 10mL 5%石碳酸水溶液 90mL 混合,即为石碳酸复红液。再取此液 10mL 加水 90mL即为稀石碳酸复红液。



4.5.2  

4.5.2.1   片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染 1min,水洗。

4.5.2.2   革兰氏碘液,作用 1min,水洗。

4.5.2.3   95%乙脱色 30s或将乙醇滴满整个涂片立即倾去再用乙醇滴 个涂片,脱色 10s,水

4.5.2.4   复染液,复染 1min,水洗,待干,镜检。

4.5.3     结果 革兰阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。

注:如用 1:10 稀释石碳复红染色液作复染,复染时间仅需 10s

 

5   步骤

5.1    10mL  110 释的检液,加到 10mL 双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基中,置 44

℃±0.5养箱中培养 24h48h不产酸也不产气,则报告为粪大肠菌群阴性。

5.2   如产产气,划线接种到伊红美蓝琼脂平板上,置  36±1  18h24h。同时取 该培养液 12 滴接种到白胨水中,置 44±0.5培养 24h±2h

经培在上述平板上观察有无典型菌落生长粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上 的典型菌落呈深紫黑色圆形整齐表面光滑湿润常具有金属光泽也有的呈紫黑 色,不带或略带金属光泽,或粉紫色,中心较深的菌落,亦常为粪大肠菌群,应注意挑选。

5.3   挑取述可疑菌落,涂片作革兰氏染色镜检。

5.4   胨水培养液中,加入靛基质试剂  0.5mL,观察靛基质反应。阳性者液面呈玫 瑰红色;阴性反应液面呈试剂本色。

 

 

6   报告 根据发酵乳糖产酸产气平板上有典型菌落并经证实为革兰氏阴性短杆菌靛基质试

验阳性,则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。

 


四、铜绿假单胞菌


1   范围 本规规定了化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法。 本规范适用于化妆品中铜绿假单胞菌的检验。

 

2   定义 本规范采用下列定义。

绿单胞Pseudomonas  aeruginosa于假属,氏阴,氧化 酶阳性能产生绿脓菌素此外还能液化明胶还原硝酸盐为亚硝酸盐 42±1℃条件 下能生长。

该菌对人有致病力,可使伤处化脓,引起败血症等。

 

3   仪器

3.1   培养42±136±1

3.2   三角250mL

3.3   试管15×150mm

3.4   灭菌皿:直径 90mm

3.5   灭菌度吸管,10mL1mL

3.6   显微

3.7   载玻

3.8   接种、接种环。

3.9   电磁

3.10   高压菌器。

 

4   试剂

4.1   SCDLP 液体培养基 见总 3.2

4.2   十六基三甲基溴化铵培养基

成分牛肉膏                                          3g 蛋白胨                 10g 氯化钠                                                 5g 十六烷基甲基溴化                                                  0.3g 琼脂                    20g 蒸馏                                            1000mL

制法除琼脂外,将上述成分混合加热溶解,调 pH  7.47.6,加入琼脂,68.95kPa

115  10 lb20min 菌后,制成平板备用。

4.3   乙酰培养基

成分:乙酰                                     10.0g 氯化      5.0g 无水磷酸                                         1.39g

无水磷酸                       0.73g 硫酸MgSO4.7H2O                                                   0.5g       0.012g                                                          20g 蒸馏   1000mL

制法除琼脂和酚红外,将其它成分加到蒸馏水中,加热溶解,调 pH 7.2,加入琼 脂、酚红,103.43kPa121  15 lb20min 高压菌后,制成平板备用。

4.4   绿脓素测定用培养基

成分蛋白                                        20g 氯化           1.4g 硫酸                                                     10g                18g 甘油(化                                            10g 蒸馏    1000mL

制法将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中,加温使其溶解,调 pH 7.4,加入 琼脂和甘油加热溶解分装于试管内68.95kPa115  10 lb20min高压灭菌后制成

斜面备用。

4.5   明胶养基

成分牛肉                                          3g 蛋白                  5g                                               120g 蒸馏  1000mL

制法取各成分加到蒸馏水中浸泡 20min随时搅拌加温使之溶解 pH 7.4 于试管内,经 68.95kPa115  10 lb20min 菌后,直立制成高层备用。

4.6   硝酸蛋白胨水培养基

成分蛋白                                        10g 酵母                       3g 硝酸                                          2g 亚硝酸             0.5g 蒸馏                                        1000mL

制法将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中,加热使之溶解,调 pH 7.2沸过滤后 补足液量加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解混匀分装到加有小倒管的试管中68.95kPa115

 10 lb20min 灭菌后备用。

4.7   普通脂斜面培养基

成分蛋白                                        10g 牛肉                3g 氯化                                                 5g              15g 蒸馏                                           1000mL

制法除琼脂外,将其余成分溶解于蒸馏水中,调 pH 7.27.4加入琼脂,加热溶 解,分装试管,103.43kPa121  10 lb20min 高压灭菌后,制成斜面备用。

 

5   步骤

5.1   增菌养:取 1:10 样品稀释液 10mL 加到 90mL  SCDLP 液体培养基中,置 36±1

 培养  18h24h。如有铜绿假单胞菌生长,培养液表面多有一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色 或蓝绿色。

5.2   离培养:液的挑取,划线在十甲基琼脂 36±1培养 18h24h铜绿假单胞菌在此培养基上其菌落扁平无定型向周 边扩散或略有蔓延表面湿润菌落呈灰白色菌落周围培养基常扩散有水溶性色素此培 养基选择性强,大肠艾希氏菌不能生长,革兰氏阳性菌生长较差。

在缺十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离将菌液划线接种于平 板上,放 36℃±1℃培养 24h±2h绿假单胞菌在此培养基上生长良好,菌落扁平,边缘 不整,菌落周围培养基略带粉红色,其它菌不生长。

5.3   色镜检:疑的涂片氏染检为阴性行氧 试验。

5.4   化酶试验小块白色放在皿内菌玻取铜绿 单胞菌可疑菌落涂在滤纸片上然后在其上滴加一滴新配制的 1%二基对苯二胺试液

15s30s 出现粉红色或紫红色时为氧化酶试验阳性若培养物不变色为氧化 验阴性。

5.5   绿脓素试验:取可疑菌落 2 个~3 个,分别接种在绿脓菌素测定培养基上,置 36

±1℃培养  24h±2h入氯仿  3mL5mL,充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液 待氯仿提取液呈蓝色时用吸管将氯仿移到另一试管中并加入 1mol/L 的盐酸 1mL 左右, 振荡后,静置片刻。上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性,表示被检物中有绿脓 菌素存在。

5.6   酸盐还原验:疑的绿单胞养物在硝水培 36±1培养 24h±2h结果凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者, 即为阳性,表明该菌能还原硝酸盐,并将亚硝酸盐分解产生氮气。

5.7   胶液化试铜绿菌可的纯,穿在明基内

36±1 24h±2h取出放冰箱 10min30min如仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶 液化试验阳性;如凝固不溶者为阴性。

5.8  42长试取可绿假纯培接种琼脂养基 放在 42±1培养箱中培养 24h48h铜绿单胞菌能生长为阳性而近似的荧光假 单胞菌则不能生长。

 

6   报告 被检品经增菌分离培养后经证实为革兰氏阴性杆菌氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳

性者即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌如绿脓菌素试验阴性而液化明胶硝酸盐还 原产气和 42℃生长试验三者皆为阳性时,仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。


五、金黄色葡萄球菌


1   范围 本规规定了化妆品中金黄金色葡萄球菌的检验方法。 本规范适用于化妆品中金黄色葡萄球菌的检验。

 

2   定义 本规范采用下列定义

金黄葡萄球Staphylococcus aureus兰氏阳性球菌呈葡萄状排列无芽 无荚膜,能分解甘露醇,血浆凝固酶阳性。

该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种能引起人体局部化脓性病灶严重时可导 致败血症。

 

3  

3.1   显微

3.2   恒温养箱:36±1

3.3   离心

3.4   灭菌管,1mL10mL

3.5   灭菌管:15×150mm

3.6   载玻

3.7   酒精

 

4   试剂

4.1   SCDLP  液体培养基 见总 3.2

4.2   7.5氯化钠肉汤

成分蛋白                                  10g 牛肉           3g 氯化                                               75g

蒸馏水加                         1000mL

制法将上述成分加热溶解,调 pH 7.4,分装,103.43kPa121  15  lb15min 压灭菌。

4.3   Baird Parker 平板

成分:胰蛋白                                   10g 牛肉      5g 酵母        1g 丙酮                              10g 甘氨    12g 氯化锂(LiCl?6H2O                            5g


                                          20g

蒸馏                                 950mL

pH7.0±0.2

增菌的配制:30%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1碲酸钾溶液 10mL 混合,保存 于冰箱内。

制法将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸完全溶解,冷至  25±1℃校正  pH。分装每

95mL103.43kPa121  15 lb)高压灭菌 15min临用时加热溶化琼脂 95mL 加入 预热至 50左右的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL摇匀后倾注平板培养基应是致密不透明的。 使用前在冰箱贮存不得超过 48h±2h

4.4   血琼培养基

成分:营养琼                            100mL

脱纤维羊(或兔血)              10mL

制法:将营加热待冷至  50℃左右作加维羊匀,制成 平板,置冰箱内备用。

4.5   甘露发酵培养基

成分蛋白胨                                        10g 氯化钠      5g 甘露醇   10g 牛肉膏                                          5g

0.2%麝香草蓝溶               12mL

蒸馏                                 1000mL

制法将蛋白胨氯化钠牛肉膏加到蒸馏水中加热溶解 pH7.4甘露醇和 指示剂,混匀后分装试管中,68.95kPa115  10 lb20min 灭菌备用。

4.6   兔()血浆制备

 3.8柠檬酸钠溶液,103.43kPa121  15  lb30min 高压灭菌,1 份加兔(人)全

 4 份,匀静置;2000rpm3000rpm 离心 3min5min。血球下沉,取上面血浆。

 

5   步骤

5.1   增菌 110 释的样品接种到 90mL SCDLP 液体培养基中 36±1 培养 24h±2h

注:无此培养基也可用 7.5氯化钠肉汤。

5.2   分离自上述增菌培养液中 1划线接种Baird Parker 氏培 无此培养基也可划线接种到血琼脂平板 36±1培养 24h48h血琼脂平板上菌落 呈金黄色,大而突起,圆形,不透明,表面光滑,周围有溶血圈。在 Baird Parker 氏培养基 上为圆形,光滑,凸起,湿润,直径为  2mm3mm,颜呈灰色到黑色,边缘为淡色,周 围为一混浊带在其外层有一透明带用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度偶然会遇到 非脂肪溶解的类似菌落,但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上,置  36

℃±1℃培养 24h±2h

5.3   色镜检:纯菌片,兰氏镜检色葡为革 阳性菌排列成葡萄状无芽胞无夹膜致病性葡萄球菌菌体较小直径约为 0.5ìm

1ìm

5.4   露醇发酵取上菌落甘露培养在培面上

2mm3mm 的灭菌液体石蜡 36±1培养 24h±2h金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇 产酸。

5.5   血浆凝固酶试验:吸取 1:4 新鲜血浆 0.5mL放入灭菌小试管中,加入待检菌 24h±2h 肉汤培养物 0.5mL混匀,放 36±1恒温箱或恒温水浴中,每半小时观察一次,6h 之内 如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤养基


0.5mL,分加入灭菌 1:4 血浆 0.5mL,混匀,作为对照。

 

6   报告 凡在述选择平板上有可疑菌落生长经染色镜检证明为革兰氏阳性葡萄球菌并能发酵甘露醇产酸,血浆凝固酶试验阳性者,可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。


六、霉菌和酵母菌


1   范围 本规规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检测方法。 本规范适用于各种化妆品中霉菌和酵母菌的计数。

 

2   定义 本规范采用下列定义。

霉菌酵母菌数测Determination of molds and yeast count是指化品检样在一定条 件下培养后1g 1mL 化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量藉以判明化妆品被霉菌 和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。

本方根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性在虎红培养基上 28±2℃培养72h,计算所生长的霉菌和酵母菌数。

 

3  

3.1   培养28±2

3.2   振荡

3.3   天平。

3.4   三角250mL

3.5   试管15×150mm

3.6   平皿直径 9cm

3.7   吸管1mL10mL

3.8   量筒200mL

3.9   酒精

3.10   高压菌器。

 

4   试剂

4.1   生理 见总则中 3.1

4.2   虎红孟加拉红)培养基

成分蛋白胨                                          5g 葡萄糖          10g 磷酸二氢钾                                                 1g 硫酸(含 7H2O     0.5g 琼脂                                            20g

1/3000 虎红                    100mL

四氯四碘荧光素)

蒸馏                                 1000mL

                                   100mg

制法:将述各成分除虎红外加入蒸馏中溶解后再加入虎溶液。分后,103.43kPa121  15 lb20mi高压灭菌,另用少量乙醇溶解氯霉素,过滤溶解后加入培养基中,若无氯霉素,使用时每 1000mL 加链霉素 30mg

 

5   步骤

5.1   样品 见菌落总数测定中 6.1

5.2    110110011000  检液各  1mL  分别注入灭菌平皿内,每个稀释度各用  2

个平皿注入融化并冷至 45±1左右的虎红培养基充分摇匀凝固后翻转平板

28±1  72h±2h,计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长,为避免 影响其它霉菌和酵母菌的计数时,于 48h±2h 应及时将此平板取出计数。

5.3   算方法:每个生长和酵落数每个的平 落数。判定结果时,应选取菌落数在 5 个~50 个范围之内的平皿计数,乘以稀释倍数后, 即为每 g mL)检中所含的霉菌和酵母菌数。其它范围内的菌落数报告应参照菌落 总数的报告方法报告之。

5.4   g或每 mL妆品含霉菌和酵母菌数以 CFU/gmL)表示。

 

 原文链接:http://www.iwuchen.com/

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