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药厂净化车间沉降菌测试标准操作规程
药厂净化车间沉降菌测试标准操作规程
1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。
2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定净化车间的洁净度。
3、所用的仪器和设备
1）高压消毒锅：使用时参照文件GZ-ZL-SOP-066-00进行操作。
2）恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。
4、培养基：普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。
5、测试步骤
1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。
2）培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。
3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
6、注意事项
1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
2）采取一切措施防止人为对样本的污染。
3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
7、测试规则
1）测试状态
（1）沉降菌测试前：被测试净化车间（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。被测试净化车间（区）已消毒。
（2）测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。
（3）测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
2）测试时间
（1）对单向流，如100级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
（2）对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
8、沉降菌计数
1）最少采样点数目：可按表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。
表1最少采样点数目
|
面积(m2) |
洁净度级别 |
|||
|
|
100 |
10000 |
100000 |
300000 |
|
＜10 |
2～3 |
2 |
2 |
2 |
|
≥10～＜20 |
4 |
2 |
2 |
2 |
|
≥20～＜40 |
8 |
2 |
2 |
2 |
|
≥40～＜100 |
16 |
4 |
2 |
2 |
|
≥100～＜200 |
40 |
10 |
3 |
3 |
注：表中的面积对于单向流净化车间是指送风面积，对于非单向流净化车间是指房间面积。
表2最少培养皿数
|
洁净度级别 |
所需Φ90mm培养皿数（以沉降0.5小时计） |
|
100 |
14 |
|
10000 |
2 |
|
100000 |
2 |
|
300000 |
2 |
2）采样点的布置：工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某 局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。
3）记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。
4）结果计算：用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
平均菌落数的计算见下式：m1+m2+……+mn
平均菌落数m=n
式中：m为平均菌落数；m1为1号培养皿菌落数；m2为2号培养皿菌落数；mn为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。
5）结果评定：用平均菌落数判断净化车间的空气中的微生物。
6）净化车间（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准（见表3）。
表3
|
洁净级别 |
100级 |
10000级 |
100000级 |
300000级 |
|
标准（平均） |
1个/皿 |
3个/皿 |
10个/皿 |
15个/皿 |
7）若某净化车间（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
主要参考文献：国家标准GB/T 16294-1996
原文来源：http://www.iwuchen.com/
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