什么是细胞室，细胞室管理及设置规范

细胞室一般就是负责单克隆抗体、HIV、体细胞等治疗制剂和诊断试剂、生产用细胞及牛血清等检验的专用实验室；并包括负责相应品种国家药品标准、一类新药和进口药品标准的技术审核、复核、修订或起草等；负责相应品种国家标准物质的研制、标定和分发；开展相应技术方法研究及技术人员培训。

病理科细胞室主要服务于临床，为临床医生提供及时而准确的细胞学检查结果，它通过无创或微创的方式，既减轻病人检查时的痛苦又可以获得直接客观的结果。

一细胞室如何设置

1)       常规细胞室的设置和设施

1.        无菌操作细胞室：

1)       由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成

2)       更衣间：位于培养室最外部，用于更换洁净的衣帽鞋口罩。放置消毒的防护服、衣帽柜、鞋柜。

3)       缓冲间：位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。放置电冰箱、液氮灌、消毒好的无菌物品等。

4)       操作间：位于内部，专用于无菌操作、细胞培养。放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。

房间要求：独立房间，按洁净厂房要求建造，并需要保持空气消毒和清洁无尘：

1)       紫外线灯—产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。

2)       空气过滤的恒温恒湿装置—－最好，空气洁净度级别如下：

注：空气洁净度级别表：一般普通培养室常选用100000级的

2.        准备室：常设置在无菌操作细胞室外部，主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。主要设置：离心机、水浴锅、定时钟表、普通天平及日常分析处理物

3.        洗刷消毒间：要和其他区域分开，最好独立一室，主要用于各种培养器皿的清洗、准备和消毒，常设置：烘箱、高压蒸汽消毒锅、去离子水或者蒸馏水处理器、酸缸、水槽刷子等。

二．细胞室常用的基本设备

1.仪器：

1)       超净工作台－常用侧流式（垂直流）工作台，洁净度应达到100级。国内产品一般都可以达标。视场地大小选用一个较宽的或者多个较小的，如：北京嘉创博远生产的VC-S-1040

2)       显微镜：倒置荧光显微镜，若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。需国外较好产品，如：Olympus

3)       CO2培养箱：需国外产品，如：SANYO/三洋

4)       干燥箱：电热干燥箱升温较高，一般需达到160℃以上。国内产品可达标

5)       水纯化装置：产生去离子水，可用三蒸水替代。国外产品如：MillQ

6)       冰箱：低温冰箱（-20℃）可选国内的、超低温冰箱（-70,80C,）需要国外产品

7)       液氮罐：国内产品可

8)       离心机：国内产品可，低速离心机即可，不需要低温冷冻。用于细胞沉降，高速不好。

9)       精密电子天平：国产即可，需达到精密度：分析天平的感量为0.1mg、0.01mg和0.001mg。

10)    消毒器：高压蒸汽消毒锅，国产

11)    滤器：用于过滤培养基，国产进口都可

2.常用的培养器皿：

1)       培养瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量（ml）表示，如250ml、100ml、25ml等；进口培养瓶则多以底面积（cm2）表示。

2)       培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

3)       多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

4)       培养操作有关的器皿：

a)        贮液瓶：主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

b)       吸管：主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管，除可以作吸取、转移液体外，弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。

c)        加样器（移液器）：用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小，吸量准确、方便。尤以微量加样器，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性良好。目前，可高温消毒的，多通道的各类移液器可供使用者选择，能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。

d)       其他用品：尚有收集细胞用的离心管，放置试剂或临时插置吸管用的试管，装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器，用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽，套于吸管顶部的橡胶吸头，封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗，超净工作台使用的酒精灯，供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。

三 细胞室管理规章制度

细胞室是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度，接受实验室管理人员的管理。

第一章 总则

第一条 细胞室主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞室必须预先征得实验室负责人和细胞室负责人同意。

第二条 进出细胞室实验需要严格登记。如有不符合实验室工作和生物安全要求的，实验室负责人和细胞室工作人员有权责令整改。

第三条 使用人员需参加专门的细胞室使用规范培训并通过考核后，方可获准进入细胞室进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞室或使用相关设备。

第四条 细胞室正常使用过程中，人员进出应通过缓冲间和风淋间；进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。实验用品应尽量一次带入，严禁将与实验无关的物品带入实验室，在细胞室内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。

第五条 实验人员应爱护实验室各类仪器，按照规则使用并保持设备清洁。实验中的昂贵设备，未经许可不得擅自开关。精密仪器需经专门培训后方能操作未经许可不得改变设备仪器的预设参数。设备仪器出现故障或发生事故，应及时向实验室负责人报告，安排专业人员进行检修。

第二章 条例

第一条 常规操作

1. 穿着专用实验服。实验人员必须在细胞室缓冲间内更换细胞室专用实验服，严禁不穿实验服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞室。

2. 穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。

3. 细胞室最多可6个人同时使用。

4. 实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出细胞室。

第二条 培养箱使用规则

1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
　注： 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。

2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。

3. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
4. 培养箱内细胞培养的放置需整洁有序，方便查找，同时应尽量提高培养箱的使用效率，负责老师可视实验情况启用或停止空培养箱的使用，节约资源。
5. 普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
　注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。

6.原代细胞需放置在原代培养专用培养箱培养，不得放置于其他培养箱，如一段时间内无原代细胞实验，负责人可协调安排培养箱供其他细胞培养使用。

7.实验人员应经常注意检查培养箱温度、CO2气体量是否相符设定值。密切注意培养箱内的增湿盘，定期更换无菌水并进行消毒。密切注意培养箱内情况，如出现霉变、菌斑、支原体和衣原体感染或其他明显染菌迹象，应立即通知管理员及其它使用者。

第三条 显微镜使用规则

1. 倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2. 离开细胞室时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。

3.一次细胞实验使用完毕后，在显微镜使用记录本上登记。

4.荧光显微镜属于贵重仪器需遵循贵重仪器预约使用规程。

第四条 超净台相关操作规则

1. 超净台使用遵循预约原则。在细胞室入口处预约，细胞室内填写使用登记。

a：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。

b：使用记号笔在预约表格上提前预约下一周的使用时间，请注意周六周日是指上周的周末。

c：预约内容请包括：时间范围，姓名，如特殊实验请写明。

2. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。

3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
　注： 消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。

4. 超净台中应摆放废液杯，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内加入NaOH溶液处理片刻，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入生物样品专用垃圾桶中
　注： 废液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。

5.细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。

第五条 器具的清洗规则

1. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。
　注： 可回收器皿必要时先初步涮洗后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。　　

2. 清水冲洗后及时放入酸缸浸泡，应由使用者本人及时清洗晾干备用，操作时请注意带橡胶手套，小心操作。
　注： 禁止长时间浸泡于清水中，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其完全失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。

洗涤程序：清水冲十次以上去除重金属残留，然后冲去离子水5次，再用超纯水5次，倒置于烘箱中晾干。并及时包扎灭菌。

第六条 冰箱、试剂等相关操作规则

1. 从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。严禁长时间敞开冰箱门。
2. 各人存放于冰箱内的培养液、生化试剂、样品要注明姓名、配制日期、样品名称，特殊试剂需获得细胞室管理人员同意后方能放置。不得使用他人的培养液或其他生化试剂。

3. 分装好的血清长时间保存于-80℃，使用前放于4℃预解冻。原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4℃并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。

4.细胞室内的冰箱空间有限，尽量仅放置使用频率较高的试剂。请勿将一些闲置试剂，污染试剂长期放置在细胞室。

5.工作人员会定期对冰箱进行清理，发现无标记，过期试剂等违规物品将全部清除出去，并且查找试剂配置人给予警告。

第七条 进入细胞室物品控制

1. 所有进入细胞室的物品需经过传递窗，尽量经过紫外照射，酒精表面消毒。

2. 严禁将可能含有污染物或病原菌的实验物品带入细胞室。

3. 细胞室内仅放置少量实验必须耗材即可，不得整箱搬入，出现洁净室内物品堆积状况。

4. 细胞室内储物柜的物品放置由相关管理人员安排，并做标记。

第八条 细胞室清洁守则

1.  每周值日生时间从周六开始，至下周五结束。
2. 日常维护：注意培养箱显示正常，显微镜，冰箱，超净台的正常使用与维护。细胞室内以及门口生物样品专用垃圾桶的及时清理。

3. 每周大清洁：每周五下午五点用新洁尔灭打扫细胞室。

清洁顺序：擦超净台（用酒精棉球）；用新洁尔灭擦桌面，培养箱，超净台以及冰箱外壁，及桌上的仪器，细胞室墙面，传递窗，风淋室；给水浴锅加水或换水，细胞室衣柜和拖鞋摆放整齐，拖地，紫外消毒细胞室30分钟。

注：若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水，根据经验未来一周内培养箱不会干水，但值日生仍应经常检查，以便及时发现异常情况。切记给培养箱加灭菌水。
4. 在没有出现问题的情况下，每2个月清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于另一个培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；启动培养箱自消程序。

第九条 人员培训

1.由将要做细胞实验的人员提出申请，填写细胞室使用申请表。

2.细胞室负责老师视申请人数酌情安排培训时间，培训内容包括安全培训、理论知识与实践操作培训。

3.培训考核合格后由导师、培训老师、细胞室负责人签字确认授予其细胞室使用权限。

4.培训不合格者重新参加培训。

第十条 制度的实施与处罚

1.细胞室负责人以及管理人员密切关注细胞室的使用情况，发现违反规章操作者首先给予提醒，但须做记录。

2.对于一周内违反3次以内者予以警告，3-5次者给予停止细胞室使用权限2周，超过5次者停用其对细胞室使用权限，需重新参加培训后才能再次使用。

第三章 附则

本规章制度从公布之日起开始执行，由生物医学工程团队实验室管理委员会负责解释及更正。本实验室追求不断地进步，各位老师及使用人员若有良好的建议可与细胞室负责人或实验室管理委员会成员沟通，我们会及时协调，旨在为团队提供和谐，高效的实验条件。

细胞室使用申请表

编号：

注：本表一式3份，细胞实验室负责人一份，导师和本人一份，实验室委员会存档一份。